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SÉQUENÇAGE HAUT DÉBIT DE L'ADN


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Exemple de diversité au sein d’un gène

dessin : Exemple de diversité au sein d’un gène

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Plusieurs mutations sont identifiées dans le gène de la myostatine (MSTN) chez différentes races bovines. Les boîtes bleues, grises ou rouges correspondent respectivement à des mutations sur le gène de la myostatine, conservative, silencieuses ou ayant des conséquences avérées sur la... 

Crédits : Encyclopædia Universalis France

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Détermination classique de la séquence d’un fragment d’ADN

dessin : Détermination classique de la séquence d’un fragment d’ADN

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Le mélange réactionnel contient l'amorce et l'ADN matrice à séquencer, les ddNTPs marqués avec les fluorophores, les dNTPs et l'ADN polymérase. La polymérase va copier la matrice par élongation à partir de l'amorce. L'élongation se termine lorsqu'un ddNTP marqué par un fluorochrome... 

Crédits : Encyclopædia Universalis France

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Principe de la PCR en émulsion (Ion Torrent®)

dessin : Principe de la PCR en émulsion (Ion Torrent®)

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Les différents fragments d'ADN simple brin sont fixés sur les microbilles via les adaptateurs (dans un rapport quantitatif permettant majoritairement la présence d'une seule molécule d'ADN sur chaque bille). Au sein de réacteurs individualisés, les fragments initiaux à la surface des billes... 

Crédits : Encyclopædia Universalis France

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Séquençage de l’ADN par synthèse dans la méthode Illumina®

dessin : Séquençage de l’ADN par synthèse dans la méthode Illumina®

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Le séquençage de l'ADN par la méthode Illumina® commence par une amplification par PCR en « pont » (a). Les molécules d'ADN simple brin spatialement éloignées les unes des autres sont fixées à la lame par complémentarité avec une amorce contenue dans les adaptateurs (deux types... 

Crédits : Encyclopædia Universalis France

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Séquençage de l’ADN par la méthode Ion Torrrent®

dessin : Séquençage de l’ADN par la méthode Ion Torrrent®

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Lors de l'étape d'élongation, l'ajout du dNTP par la polymérase libère dans le milieu réactionnel un proton H+ (a). Les billes recouvertes de leurs produits d'amplification sont placées dans les puits (partie grise) d'une puce semi-conductrice (b). La libération naturelle d'un ion proton... 

Crédits : Encyclopædia Universalis France

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Séquençage de troisième génération par nanopore

dessin : Séquençage de troisième génération par nanopore

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Le séquençage de l'ADN par passage au travers d'un nanopore est assez sensible pour permettre l'analyse d'une molécule individuelle d'ADN (voire d'ARN). Une enzyme (unwinding enzyme) de type hélicase sépare les deux brins de l'hélice d'ADN et linéarise l'ADN simple brin. Ce monobrin va... 

Crédits : Encyclopædia Universalis France

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Préparation de cellules isolées pour l’étude de leurs acides nucléiques

dessin : Préparation de cellules isolées pour l’étude de leurs acides nucléiques

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Les cellules, par exemple contenues dans une biopsie sont séparées les unes des autres puis injectées dans une série de canaux d'un dispositif microfluidique où circule de l'huile. Les cellules sont isolées de ce milieu vecteur par l'eau qui les entoure. On peut dès lors trier les cellules... 

Crédits : Encyclopædia Universalis France

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Alignement des séquences d’ADN déterminées

dessin : Alignement des séquences d’ADN déterminées

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Les séquences déterminées correspondent à une multitude de fragments issus de la molécule d'ADN initiale. L'assemblage de ces séquences « courtes » et aléatoires (petits traits multicolores) se fait en utilisant leurs zones de chevauchement (schématisées par des « boîtes » sur... 

Crédits : Encyclopædia Universalis France

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Exemple de diversité au sein d’un gène

Exemple de diversité au sein d’un gène
Crédits : Encyclopædia Universalis France

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Détermination classique de la séquence d’un fragment d’ADN

Détermination classique de la séquence d’un fragment d’ADN
Crédits : Encyclopædia Universalis France

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Principe de la PCR en émulsion (Ion Torrent®)

Principe de la PCR en émulsion (Ion Torrent®)
Crédits : Encyclopædia Universalis France

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Séquençage de l’ADN par synthèse dans la méthode Illumina®

Séquençage de l’ADN par synthèse dans la méthode Illumina®
Crédits : Encyclopædia Universalis France

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Séquençage de l’ADN par la méthode Ion Torrrent®

Séquençage de l’ADN par la méthode Ion Torrrent®
Crédits : Encyclopædia Universalis France

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Séquençage de troisième génération par nanopore

Séquençage de troisième génération par nanopore
Crédits : Encyclopædia Universalis France

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Préparation de cellules isolées pour l’étude de leurs acides nucléiques

Préparation de cellules isolées pour l’étude de leurs acides nucléiques
Crédits : Encyclopædia Universalis France

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Alignement des séquences d’ADN déterminées

Alignement des séquences d’ADN déterminées
Crédits : Encyclopædia Universalis France

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