PCR (polymerase chain reaction) ou AMPLIFICATION EN CHAÎNE PAR POLYMÉRASE

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Les étapes d'une PCR classique

Quelle que soit l'opération menée, l'extraction de l'ADN précède son amplification. L'ADN est extrait à partir de l'échantillon qu'on souhaite analyser (salive, sang, cheveux, prélèvement issu d'une biopsie, poudre d'os actuel ou ancien, etc.). L'opération peut être menée à partir d'une seule cellule, un spermatozoïde par exemple, voire de fragments dégradés de l'ADN. Des microméthodes d'extraction ont donc été mises au point.

C'est à ce stade que se situe la principale difficulté de la PCR : une contamination par un ADN étranger fausserait les résultats s’il était amplifié en même temps ou à la place de l'ADN qu'on souhaite étudier. Pour éviter de telles contaminations, des pièces séparées dans le laboratoire sont réservées à chaque étape : extraction d'ADN ; préparation du mélange réactionnel ; amplification elle-même ; étude des produits amplifiés enfin. De plus, on utilise un matériel stérile (récipients, pipettes, etc.) à chaque étape ; les réactifs sont également stérilisés et préparés en petites fractions correspondant au volume suffisant pour une seule expérience ; l'opérateur porte un masque et des gants. L’étape suivante, la conception des amorces d'amplification, est également critique. Il faut en effet construire les amorces pour la réaction d'amplification en les adaptant à chaque situation. Pour ce faire, il fut longtemps nécessaire de connaître les séquences d'une vingtaine de nucléotides qui encadrent la séquence d'ADN qu'on souhaite amplifier et de choisir celles qui ne provoqueront pas de réactions parasites. Les amorces s'accordant aux séquences complémentaires de ces fragments sont produites dans un synthétiseur d'ADN.

Tous les éléments nécessaires à la réaction sont ensuite mélangés dans un même tube contenant un milieu réactionnel adapté aux caractéristiques optimales pour le bon fonctionnement de l'enzyme. Ce sont : l'ADN total extrait qui contient l'ADN à amplifier, servant de matrice lors des premiers cycles d'amplification ; une polymérase thermostable ; les deux amorces en tr [...]


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Généalogie du dodo

Généalogie du dodo
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Appariement des brins d’ADN

Appariement des brins d’ADN
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Cinétique d’une réaction de PCR

Cinétique d’une réaction de PCR
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Diagnostic d’un agent pathogène

Diagnostic d’un agent pathogène
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Pour citer l’article

Véronique BARRIEL, « PCR (polymerase chain reaction) ou AMPLIFICATION EN CHAÎNE PAR POLYMÉRASE », Encyclopædia Universalis [en ligne], consulté le 13 octobre 2020. URL : https://www.universalis.fr/encyclopedie/pcr-amplification-en-chaine-par-polymerase/