BIOLOGIELa biologie moléculaire

À partir de 1965-1970, de nombreux chercheurs estiment que l'étude du colibacille n'apportera plus grand-chose. Dans l'édition de 1968 de sa Biologie moléculaire du gène, Watson propose la biologie moléculaire des organismes supérieurs comme nouvelle frontière de la biologie.

Le virage vers « l'organisme supérieur » ne se révèle cependant productif qu'avec l'introduction des méthodes de la génétique moléculaire (ou génie génétique, ou manipulation génétique, selon les intentions), qui ne deviennent réellement efficaces qu'après 1980. On désigne ainsi un ensemble de manipulations in vitro de l'ADN mises au point à partir de 1975 en tirant partie des connaissances accumulées sur la génétique du colibacille, l'enzymologie des acides nucléiques, la biologie des virus et la chimie de l'ADN. La combinaison de la coupure de l'ADN génomique au niveau de séquences palindromiques par des enzymes dites de restriction (tabl. 2), l'isolement des fragments d'ADN ainsi obtenus, leur ligation à des mini-chromosomes bactériens (les plasmides) ou à des bactériophages comme le phage lambda, permettent le clonage de fragments d'ADN génomique (fig. 4). En se servant de la transcriptase inverse, enzyme isolée de cellules infectées par des rétrovirus, on peut copier l'ARNm en ADNc (« c » pour copie) puis cloner les ADNc dans des plasmides. On constitue des bibliothèques d'ADN génomique d'une espèce et d'ADNc de tel ou tel tissu sous forme de plasmides ou de phages recombinants. On peut ensuite en isoler le gène ou l'ADNc d'intérêt par diverses techniques. La culture du microbe qui le contient fournit des quantités pondérales d'un gène. Gènes et ADNc peuvent être placés dans des vecteurs d'expression et être traduits en la protéine pour laquelle ils codent dans le colibacille ou dans une cellule hôte. Ils pe [...]