On obtient expérimentalement des protoplastes au laboratoire à partir de cellules bactériennes ou végétales.
On appelle protoplaste bactérien une cellule bactérienne (provenant d'une bactérie Gram+) libérée de sa paroi mucopolysaccharidique, généralement après hydrolyse puis dissolution des « muréines » de cette paroi par une enzyme extraite du blanc d'œuf, le lysozyme. Le protoplasme de la cellule bactérienne ainsi libéré dans le milieu prend une forme sphérique en milieu hypertonique ; ce « protoplaste » reste entouré par un plasmalemme intact et fonctionnel. Nombre d'activités métaboliques se poursuivent dans les protoplastes bactériens mais ceux-ci sont incapables de se multiplier. Les protoplasmes des bactéries Gram— sont plus difficilement séparés de leur paroi que ceux des bactéries Gram+ ; certains procédés enzymatiques permettent cependant de réaliser cette séparation et l'on désigne sous le nom de sphéroplastes des protoplasmes isolés des cellules bactériennes Gram—.
Les protoplastes végétaux proviennent de cellules végétales ayant perdu leur paroi pecto-cellulosique. Dès 1892, Klercker employait un procédé mécanique pour préparer de tels protoplastes. Le procédé consistait à plasmolyser fortement les cellules d'une tranche de tissu végétal, puis à dilacérer les parois pecto-cellulosiques à l'aide d'un scalpel. Le broyat de tissu était ensuite remis en suspension dans un milieu légèrement hypotonique. Les protoplasmes cellulaires non meurtris par l'opération s'échappaient des cadres cellulosiques brisés et prenaient une forme sphérique dans le milieu. C'étaient les protoplastes végétaux. Le rendement de ce procédé mécanique était extrêmement faible.
Vers 1960, Cocking introduisit la méthode enzymatique pour la préparation des protoplastes végétaux. Cette méthode consiste à attaquer par des cellulases et pectinases les parois cellulaires d'un tissu ou d'un cal de tissu végétal en culture, ou bien encore celles d'une suspension de cellules végétales isolées cultivées su … ]
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