Directeur de la bibliothèque d'Alexandrie vers ~ 195, Aristophane de Byzance publia une version d'Homère, la Théogonie d'Hésiode, Alcée, Pindare, Euripide, Aristophane et peut-être Anacréon. Un grand nombre des « arguments » qui figurent au début des manuscrits de comédies et de tragédies grecques sont attribués à Aristophane de Byzance : ces études sur la comédie grecque servent de référence à des ouvrages sur les personnages types de la comédie athénienne. Il révisa et continua les Pinakes de Callimaque, sorte de répertoire biobibliographique de la littérature grecque. En sa qualité de lexicographe, il compila des recueils de termes archaïques et peu usités, de termes techniques et de proverbes.
Dans le cadre de ses activités de grammairien, Aristophane fonda une école et écrivit un traité, De l'analogie. C'est lui qui arrangea les dialogues de Platon en trilogies, et on lui attribue généralement la création du Canon d'Alexandrie (recueil de textes choisis dans chaque genre littéraire et considérés comme des exemples de perfection).
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